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凝膠電泳操作注意事項

1.緩沖系統：在沒有離子存在時，電導率小，DNA不遷移，或遷移極慢，在高離子強度的緩沖液中，電導很高并產熱，可能導致DNA變性，因此應注意緩沖液的使用是否正確。長時間高壓電泳時，常更新緩沖液或在兩槽間進行緩沖液的循環是可取的。2.瓊脂糖：不同廠家、不同批號的瓊脂糖，其雜質含量不同，影響DNA的遷移及熒光背景的強度，應有選擇地使用。3.凝膠的制備：凝膠中所加緩沖液應與電泳槽中的相一致，溶解的凝膠應及時倒入板中，避免倒入前凝固結塊。倒入板中的凝膠應避免出現氣泡，影響電泳結果。如果...

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實驗室中的化學試劑的防護之十二烷基硫酸鈉

SDS，這是一種常用試劑，全名是十二烷基硫酸鈉，大家經常用到，對于分子研究的科咖們，幾乎每天都會用到。先還是讓我們來看看萊寶百科吧。萊寶百科：十二烷基硫酸鈉（SDS）是一種白色粉末狀物質，易飄飛，是常用的生化試劑，分子式是C12H25NaSO4,CAS號是151-21-3。主要是配置各種溶液，較多用于蛋白質電泳，變性等試驗，也會用于質粒的提取。具有毒性，屬于急性毒性，對呼吸道有刺激作用，容易損傷呼吸道。好了萊寶百科的解釋，我們看完了。知道了的危害，我們來了解一下防護吧！十二烷...

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RNA提取詳解

RNA提取RNA提取試劑盒簡介：RNA是一種重要的遺傳信息分子，因此完整RNA的提取和純化，是進行Northern雜交、RT-PCR、定量PCR等RNA相關研究的重要前提。RNA提取的原理與方法：細胞中的RNA可以分為信使RNA、轉運RNA和核糖體RNA三大類，這三類RNA都存在于細胞質中,因此不同組織總RNA提取的實質就是將細胞裂解，釋放出RNA，并通過不同方式去除蛋白、DNA等雜質，終獲得高純RNA產物的過程。RNA提取流程一、樣品處理從各種不同來源樣品(如細菌、酵母、血...

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DNA產物純化常見問題

常見問題未回收或回收率低可能原因膠塊未全部溶解建議解決方案溶解凝膠時應該置于65℃水浴，不斷上下顛倒，確定膠塊*溶解后再進行下一步操作。如果凝膠濃度較大，可增加溶膠液使用量。可能原因膠塊太大(400mg)建議解決方案如果需要處理的膠塊太大，應該先將其切成小塊，做兩次回收或選用大量型回收試劑盒。可能原因電泳緩沖液pH過高建議解決方案硅膠膜在高鹽低pH值時可結合DNA，在低鹽高pH值條件下洗脫。如果電泳緩沖液pH值太高，會導致DNA無法結合或降低結合率，可在溶膠后加入3MNaAc...

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DNA純化回收

DNA產物純化試劑盒簡介：對于TA克隆、酶切或者直接測序等試驗來說，純化PCR產物或酶切產物是非常必要的。以TA克隆為例，其成功率跟目的片段的純度高低有重要關系。雖然未經過純化的PCR產物也可以跟載體連接，但會增加篩選陽性克隆的難度，因為PCR產物中的dNTP和引物等可能也會跟載體連接。在進行連接試驗時，這些非特異性的產物會跟特異性產物相互競爭，從而導致連接效率下降。DNA的片段純化回收原理在獲得DNA的片段后，一般采用吸附材料的方法去除雜質和純化DNA的片段。目前大多數生物...

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質粒提取常見問題

質粒提取常見問題常見問題1:可能原因:大腸桿菌老化建議解決方案:請涂布平板培養后，重新挑選新菌落進行液體培養可能原因:質粒拷貝數低建議解決方案:由于使用低拷貝數載體引起的質粒DNA提取量低，可更換具有相同功能的高拷貝數載體。可能原因:溶液使用不當建議解決方案:溶液P2和P3在溫度較低時可能出現渾濁，應置于37℃保溫一段時間，直溶液變為清亮后才能使用。可能原因:質粒未全部溶解(尤其質粒較大時)建議解決方案:洗脫溶解質粒時，可適當加溫或延長溶解時間。可能原因:洗脫液加入位置不正確...

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質粒提取原理及流程

質粒提取原理及流程質粒提取試劑盒簡介：質粒(Plasmid)是一種染色體外的穩定遺傳因子，大小從1-200kb不等，為雙鏈、閉環的DNA分子，并以超螺旋狀態存在于宿主細胞中。質粒主要存在于細菌、放線菌和真菌細胞中，它具有自主復制和轉錄能力，能在子代細胞中保持恒定的拷貝數，并表達所攜帶的遺傳信息。質粒提取原理及流程：較常用的質粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑(如Triton和SDS)裂解法。前兩種方法比較劇烈，適用于較小的質粒(15kb)。堿裂解法是一種應用為廣...

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基因組DNA提取常見問題

基因組DNA提取常見問題分析常見問題1：洗脫產物的DNA量很少或沒有可能原因：所提樣品材料老化或反復凍融導致基因組DNA含量下降建議解決方案：應選擇新鮮的樣品材料，如新鮮血液、新鮮菌液、剛離體的動物組織或幼嫩的植物組織等，不能及時處理的樣品應立即放入液氮或-70℃低溫保存，以免DNA降解。可能原因：樣品破壁或裂解不*導致基因組DNA未充分釋放建議解決方案：動、植物材料應在液氮中充分研磨勻漿，G+細菌、酵母等破壁較困難的樣品應用溶菌酶、酵母破壁酶或機械方式協助破壁，不同樣品的細...

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