2016-422
自1861年發明透析方法今已有一百多年。透析已成為生物化學實驗室簡便常用的分離純化技術之一。在生物大分子的制備過程中,除鹽、除少量有機溶劑、除去生物小分子雜質和濃縮樣品等都要用到透析的技術。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內,將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內。下面分別介紹透析袋和透析膜使用方法和步驟透析袋使用前處理方法:1.把透析袋剪成適當長度(10-20cm)的小段。2.在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和10mmol...
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2016-422
透析是一個簡單的擴散過程,溶質中小分子物質從高濃度溶液通過半透性膜擴散到低濃度溶液中,直滲透壓達到平衡。由于多孔膜的選擇性,使得溶質中小分子物質可以通過,而較大物質則被截留,從而分離出不同大小分子量的物質,依據分子量大小截留,可用于分離工藝,改變或控制透析的條件,可在多種透析應用中得到預期效果,通過截留分子量(MWCO)可使目標分子得到分離。所以透析袋分子量的選擇就決定了實驗的成敗。這篇文章就詳細介紹了如何選擇合適的透析袋。透析膜的材質透析膜可用動物膜和玻璃紙等,但用的多的還...
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2016-421
姬姆薩染液又稱吉姆薩染色液,姬姆薩染原液,為天青色素、伊紅、次甲藍的混合物。常用作對血液涂抹標本、血球、瘧原蟲、立克次體以及骨髓細胞、脊髓細胞等標本進行染色的染色方法。姬姆薩染色液的配制方法很簡單,但是現在很多實驗室都開始買現成的姬姆薩染液,這樣節省了時間,染色液的價格也不貴。姬姆薩染液配制方法:甲液:取瑞氏染粉1克,姬姆薩染粉0.3g,置于干燥清潔研缽中,另備甲醇(不含水或丙酮)500ml分數次加少量甲醇研磨,分次收集于棕色玻璃瓶中,每天早晚各搖3分鐘,經1星期后即可使用。...
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2016-421
瑞氏-姬姆薩染色液是利用Romanowsky??Stain?技術原理改良而成的。主要應用于血液和骨髓涂片染色。姬姆薩染色液對胞漿著色力較強,能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,著色清晰,色澤純正,但是對胞核著色偏深,核結構顯示較差。瑞氏-姬姆薩染色液原理瑞氏-姬姆薩染色液主要應用于血液和骨髓涂片染色,它是利用Romanowsky??Stain?技術原理改良而成的。細胞的著色過程是染料透入被染物并存留其內部的一種過程,此過程既有物理吸附作用,又有化學親和作用。各種細胞及細胞的各種成分...
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2016-421
嘌呤霉素(puromycin;PM)是一種蛋白質合成抑制劑,它具有與tRNA分子末端類似的結構,能夠同氨基酸結合,代替氨酰化的tRNA同核糖體的A位點結合,并摻入到生長的肽鏈中。用嘌呤霉素篩選細胞方法如下:嘌呤霉素篩選細胞轉染(24孔板進行)或電轉后培養24小時,按10%密度傳代(傳36mm平皿),繼續培養24小時,待細胞密度增20%-25%回合時;去掉培養液,PBS洗一次,加入按照佳嘌呤霉素篩選細胞的濃度(殺傷曲線試驗確定)配制好的嘌呤霉素篩選細胞培養基2-3ml。根據培養...
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2016-421
嘌呤霉素(puromycin;PM)是一種抗生素,廣泛用作蛋白質合成的抑制劑。其結構與氨酰tRNA3′端上的AMP結構相似,肽酰轉移酶能促使氨基酸與嘌呤霉素結合形成肽酰嘌呤霉素,從核糖體上脫落,從而使蛋白質合成反應中斷。嘌呤霉素的作用如下:嘌呤霉素的作用:嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑鏈霉菌(Streptomycesalboniger)發酵代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素,嘌呤霉素Puromycin通過抑制蛋白質合成而殺死革蘭氏陽性菌,各種動物和昆蟲細胞。嘌呤霉素Pur...
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2016-420
Bradford法測蛋白濃度是利用蛋白質-染料結合的原理,定量地測定微量蛋白質濃度的快速靈敏的方法。Bradford法測蛋白濃度原理考馬斯亮藍(CBB)測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。考馬斯亮藍在游離狀態下呈紅色,大光吸收在488nm;當它與蛋白質結合后變為青色,蛋白質—色素結合物在595nm波長下有大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比,因此可用于蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍結合在2min左右的時間內達到平衡,完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內保持穩定。該...
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2016-420
Bradford法又稱考馬斯亮藍法,是Bradford于1976年建立起來的一種蛋白質濃度的測定方法。bradford法定量蛋白質的原理是馬斯亮藍(CBB)測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。考馬斯亮藍在游離狀態下呈紅色,大光吸收在488nm;以下是bradford法定量蛋白質的原理及含量測定流程bradford法定量蛋白質的原理考馬斯亮藍(CBB)測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。考馬斯亮藍在游離狀態下呈紅色,大光吸收在488nm;當它與蛋白質結合后變為青色,蛋白質—色素...
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