2015-92
TTC染色液的原理及作用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)是脂溶性光敏感復合物,常用于檢測種子的生存能力以及檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結構酶系統的質子受體,能與正常組織中的脫氫酶反應而呈紅色。正常腦組織和有活力種子胚組織活細胞中的脫氫酶可以將TTC還原成不溶性的紅色穩定的三苯基甲臢(TTF),如果腦組織細胞或胚種細胞死亡或生活力衰退,則不能染色或染色較淺。因此可以根據染色部位和染色深淺程度來鑒定腦組織或者種子的活力。結果判斷正常組織被染成紅色,腦梗...
查看更多
2015-91
普魯士藍染色試劑盒的染色原理(伊紅法、中性紅法、核固紅法)普魯士藍染色試劑盒分為三種包括伊紅法、中性紅法、核固紅法等。染色原理基本相同,根據復染時染色液的不同區別為這3種方法。含鐵血黃素(hemosiderin)是一種血紅蛋白源性色素,為金黃色或棕黃色顆粒,因其含鐵、金黃色,故稱為含鐵血黃素。當紅細胞被巨噬細胞吞噬后,在溶酶體酶的作用下,血紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質和含鐵的含鐵血黃素。Perls普魯士藍反應(Prussianbluereaction)又稱為含鐵血黃素染色,...
查看更多
2015-831
抗熒光衰減封片劑——含DAPI和不含DAPI的區別抗熒光衰減封片劑是一種用于減緩熒光衰減的封片試劑。以甘油為基礎,加入抗熒光衰減劑,有強烈的抗熒光衰減作用,用于對熒光組織和細胞樣品的封片。封片后,樣品4℃或者-20℃避光可保存2-3周。在封片時用移液槍滴一滴抗熒光衰減封片液,蓋上蓋玻片就可以了。封片劑含細胞核DNA熒光染料DAPI,使實驗操作更簡便;封片劑干燥后會形成一層牢固的涂層,光學透明,非常便于后續觀察、拍照與儲存。DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-d...
查看更多
2015-831
雷帕霉素的免疫抑制作用雷帕霉素雷帕霉素(Rapamycin,RAPA,RPM),又名Sirolimus,分子式為C51H79NO13,分子量為914.2,為白色固體結晶,熔點為183-185℃,親脂性,溶解于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等有機溶劑,極微溶于水,屬大環內酯類抗生素。起初RAPA被研究作為低毒性的抗真菌藥物,1977年發現RAPA具有免疫抑制作用;1989年開始把RAPA作為治療器官移植的排斥反應的新藥進行試用。雷帕霉素(RAPA)通過不同的細胞因子受體阻斷信號傳導,阻...
查看更多
2015-831
細胞凍存液的原理及配制方法細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞培養、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術手段。在...
查看更多
2015-831
BCA蛋白濃度測定試劑盒檢測蛋白濃度的原理及特點堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+,Cu+與BCA試劑形成紫藍色的絡合物,測定其在562nm處的吸收值,并與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS,TritonX-100,Tween不影響檢測結果,但受螯合劑(EDTA,EGTA)、還原劑(DTT,巰基乙醇)和脂類的影響。實驗中,若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,可試用考馬斯亮藍(Bradford)蛋白濃度測定試劑盒。BCA法蛋白濃度檢測比考馬斯亮...
查看更多
2015-824
非變性組織/細胞裂解緩沖液內含非離子型去垢劑,能裂解細胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非變性條件下的裂解蛋白產物大限度地保留了蛋白的特性和功能,如抗原-抗體結合或酶學活性,因此適宜于進行免疫共沉淀。另外,有些抗體對非變性蛋白具有更高的結合能力或只能識別非變性蛋白的抗原位點,這種情況應該使用非變性裂解。根據使用量,取每1ml裂解液加入10ulPMSF,使PMSF的終濃度為1mM。混勻備用(PMSF現用現加)。1、樣品前處理:對于貼壁細胞:去除培養液,用PB...
查看更多
2015-714
ELISA實驗中文酶聯免疫吸附試驗。可用于測定抗原,也可用于測定抗體。間接法是多種實驗方法中常用方法。elisa間接法原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體,故稱為間接法。elisa間接法操作步驟如下:(1)將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結合的抗原及雜質。(2)加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結合,形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質由于不能與固相抗原結合,在洗滌過程中被洗去。(3...
查看更多