細胞培養常見問題分析

更新時間：2010-10-19

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1. 何時須更換培養基？
    視細胞生長密度和生長狀態而定，有的細胞消耗培養液較快，細胞有60-70%的匯合度就可以消化傳代，簡單的換液不合適，因為細胞有可能處于缺營養的狀態；另外一種需要換液情況就是細胞狀態欠佳的時候，可以用PBS先洗滌一下，再更換*培養液，去除那些死細胞和漂浮的狀態不好的細胞，可以調節一下細胞狀態。

2. 可否使用與原先培養條件不同之培養基？
    不建議。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基，而且經過一定時間馴化，若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基，細胞都有可能出現不適應，表現出生長緩慢，顆粒增多，有死細胞出現，造成細胞無法存活。也有些細胞在更換培養液后也能正常的生長，細胞狀態也能維持，但是問題往往出現在凍存后期的復蘇過程，有可能細胞沒法復蘇，所以不建議隨便更換培養基。
3. 可否使用與原先培養條件不同之血清種類？
    不建議。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。按照道理胎牛血清比小牛血清要好，但是在實際操作中未必如此，更換好的血清細胞同樣會有可能出現生長狀態欠佳，另外就是，在細胞狀態欠佳的狀態，更換好的血清有可能會適得其反，加速細胞死亡，所以不建議隨便更換血清。

4. 何謂FBS, FCS, CS, HS ?
    FBS （fetal bovine serum）和FCS （fetal calf serum）是相同的意思，兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS （calf serum）則是指小牛血清。HS （horseserum）則是指馬血清。

5. 細胞之接種密度為何？
    依照細胞株基本數據上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長或狀態欠佳之重要原因。

6. 懸浮性細胞應如何繼代處理？
    一般情況下可以加入新鮮培養基于原培養瓶中，稀釋細胞濃度即可，但不可以持續這樣操作，因為細胞的代謝物一直累積在培養液中，隨著時間的延長，濃度越來越高，會影響細胞的生長，所以建議稀釋細胞濃度傳代幾次后要做一次離心處理，去除培養液中長期累積的代謝物，這樣有利于保持細胞的狀態。

7. 冷凍管應如何解凍？
    取出冷凍管后，須立即放入37-40 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。

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