過氧化物酶（POD）生化檢測試劑盒抗逆系列
檢測方法可見分光光度法
POD廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。
試驗中所需的儀器和試劑：可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

產品型號：BC0090-50管/48樣

更新時間：2024-04-03

廠商性質：生產廠家

訪問量：2734

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生化檢測試劑盒-常量法

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產品介紹

過氧化物酶（POD）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0090
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體40 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體0.04 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

試劑二：液體置于試劑瓶內EP管中，使用前需先離心。取0.01 mL試劑二加入3.2mL試劑一混合備用（約24T），現配現用，也可根據樣本量按比例配制。

產品說明：
POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD催化H₂O₂氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

細菌、細胞或組織樣本的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

血清（漿）樣本：直接檢測。

二、測定步驟
1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至470nm，蒸餾水調零。
2、測定前將試劑一、二和三37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）放置10min。
3、樣本測定表：

試劑名稱（µL）	測定管
樣本	15
蒸餾水	270
試劑一	520
試劑二	130
試劑三	135

在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計時，記錄470nm下30s時的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。計算ΔA=A2-A1。
三、POD活性計算

血清（漿）POD活性

單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =7133×ΔA

組織、細菌或細胞POD活性

按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

按樣本質量計算

單位定義：每g組織在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/g 質量）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

按細菌或細胞數量計算

單位定義：每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/10⁴cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =14.27×ΔA
V反總：反應體系總體積，1.07mL；V樣：加入樣本體積，0.015mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
注意事項：

若一次性測定樣本較多，可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）放置10min以上，測定時加入15µL樣本和1055µL混合液測定。
如果ΔA小于0.005，可將反應時間延長到5min。如果ΔA大于0.5或者反應液中有較多氣泡產生，可將樣本用提取液稀釋后測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數。

實驗實例：
取0.1043g大鼠心臟加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上，用提取液稀釋2倍后按照測定步驟操作，用玻璃比色皿測定并計算ΔA=A2-A1=0.363-0.134=0.229。按樣本質量計算含量得：
POD（U/g 質量）=7133×ΔA÷W×2（稀釋倍數）=3.132×10⁴ U/g 質量。
取0.1049g黃楊葉片，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上，按照測定步驟操作，用玻璃比色皿測定并計算ΔA=A2-A1=0.549-0.11=0.439。按樣本質量計算含量得：
POD（U/g 質量）=7133×ΔA÷W=2.985×10⁴ U/g 質量

相關發表文獻：

Yin Y J, Chen C J, Guo S W, et al. The fight against Panax notoginseng root-rot disease using zingiberaceae essential oils as potential weapons[J]. Frontiers in plant science, 2018, 9: 1346.
Dou S, Liu S, Xu X, et al. Octanal inhibits spore germination of Penicillium digitatum involving membrane peroxidation[J]. Protoplasma, 2017, 254(4): 1539-1545.
Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)[J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.
Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019;162:364-373.(IF3.712)
Yanjiao Yin,Chuanjiao Chen,Shiwei Guo,et al. The Fight Against Panax notoginseng Root-Rot Disease Using Zingiberaceae Essential Oils as Potential Weapons. Frontier in Immunology. October 2018;(IF4.716)

參考文獻：
[1] Reuveni R. Peroxidase Activity as a Biochemical Marker for Resistance of Muskmelon (Cucumis melo) to Pseudoperonospora cubensis[J]. Phytopathology, 1992, 82(7).
[2] Doerge D R, Divi R L, Churchwell M I. Identification of the Colored Guaiacol Oxidation Product Produced by Peroxidases[J]. Analytical Biochemistry, 1997, 250(1):10-17.
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