兔SP檢測試劑盒

貨號：SP0021

規格：3ml/6ml/18ml

    本試劑盒適合于一抗為小鼠/兔 IgG 的免疫組化實驗 DAB 顯色。

    SP 試劑盒是專為免疫組化和其他免疫檢測而設計的，用以顯示組織和細胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質，同親和素一樣，對生物素有的親和力，親和素是一個堿性蛋白質（PI=10），經改造后可以轉變成中性蛋白質。鏈霉親和素等電點接近中性，對組織和細胞的非特異吸附很低，因此基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。

操作步驟:（以石蠟切片為例）
1. 切片常規脫蠟水(三次二甲苯，三次乙醇)。
2. 3% H2O2 室溫處理 5-10 分鐘以滅活內源性酶。蒸餾水洗 3 次。
3.可選步聚：
a、熱修復抗原，將切片浸入 0.01M 檸檬酸鈉緩沖液（PH6.0），電爐或微波爐加熱沸騰后斷電，間隔 5-10 分鐘后，反復 1-2 次。冷卻后 PBS（pH7.2-7.6）洗滌 1-2 次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10 分鐘，PBS（pH7.2-7.4）洗滌 2-3 次。
c、跳過此步，直接進入下一步。
4. 滴加封閉液，室溫 20 分鐘。甩去多余液體，免洗。
5. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋（稀釋后的一抗 4℃可保存一周），也可另行購買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗 37℃ 孵育 1 小時左右或 20℃ 2 小時左右，也可 4℃過夜。PBS（pH7.2-7.4）洗滌 3次，每次 2 分鐘。（一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關系。一般來說，陽性染色強度不夠時，可提高一抗濃度和延長孵育時間；背景過高時，可降低一抗濃度和縮短孵育時間。）
6． 根據用量，用稀釋液將 Bio-羊抗小鼠/兔 IgG 濃縮液按 1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入 10ulBio-羊抗小鼠/兔 IgG 濃縮液混勻，此工作液 4℃可保存一周)。滴加 Bio-羊抗小鼠/兔 IgG 工作液，20-37℃ 孵育 30 分鐘。PBS（pH7.2-7.4）洗滌 3 次，每次 2 分鐘。
7．根據使用量，用稀釋液將鏈酶親和素-POD 濃縮液按 1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入 10ul鏈酶親和素-POD 濃縮液混勻，此工作液 4℃可保存一周)。滴加鏈酶親和素-POD 工作液，20-37℃，30 分鐘。PBS （pH7.2-7.4）洗滌 4 次，每次 5 分鐘。
8．DAB 顯色：根據用量，用 PBS（pH7.2-7.4）配制，按 1ml PBS 加入 50ul 20×DAB 顯色液 A，加入 50ul 20×DAB 顯色液 B 。充分混勻后滴加到切片上。室溫顯色，鏡下控制反應時間，一般在 5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應。
9．蘇木素輕度復染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。對于細胞爬片，固定后，PBS 漂洗兩次，再用 0.5% Triton X-100 室溫孵育 20 分鐘，PBS 漂洗兩次，3% H2O2 處理 15 分鐘；PBS 漂洗兩次，接上述第 4 步。對于冰凍切片，固定后，PBS 漂洗兩次，接上述第二步。
 

注意事項：
如果染色背景過高，在 SP 反應之后，DAB 顯色之前，用加有 0.01—0.02% TWEEN-20 的 PBST（pH7.2-7.4）洗滌切片 4 次，PBS 洗 2 次，然后 DAB 顯色。
 

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