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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC5820-50T/48S
更新時間：2024-04-23
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1039
010-50973130
產品分類
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白蛋白含量檢測試劑盒（溴甲酚紫顯色法）說明書
可見分光光度法
貨號：BC5820
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體0.24 mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 2-8℃保存 | |
試劑三 | 液體0.8 mL×1支 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1 mL×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
1、 顯色液：臨用前根據樣本數量按照試劑一：試劑二：試劑三=10μL: 3990μL :40μL（4040μL，4T）的比例配制顯色液，充分混勻，現配現用；
2、 標準品：10mg/mL白蛋白標準液。臨用前取50μL10mg/mL白蛋白標準液，加入150μL提取液，配制成2.5mg/mL白蛋白標準液，現配現用。
產品說明：
白蛋白是人體血漿中最主要的蛋白質，由肝臟合成，是人體內一種重要的營養物質，可以維持血漿滲透壓，并可與多種營養物質、激素和藥物相結合。白蛋白含量可以反映機體營養狀態，也可排查影響肝臟代謝功能的疾病，如肝硬化、肝損傷、營養不良、惡性腫瘤等。
在酸性環境下，白蛋白分子帶正電荷，與帶負電荷的溴甲酚紫（Bromocresol Purple，BCP）結合生成綠色復合物，在603nm處有特定吸收峰，該復合物吸光值與白蛋白濃度成正比。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、分析天平、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 組織樣本：按質量（g）: 提取液體積（mL）1 : 5~10比例加入提取液（建議稱取0.1g樣本，加入1.0mL提取液），冰浴勻漿后，于4℃，8000g，離心10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。
2. 細菌/細胞樣本：按細菌/細胞數量（106）：提取液體積（mL）5~10: 1的比例加入提取液（建議5百萬細菌/細胞加入1.0mL提取液），冰浴超聲破碎細菌/細胞（功率200W，超聲3s，間隔7s，總時間5min），然后于4℃，8000g，離心10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。
3. 液體樣本：直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。
二、測定步驟
1．可見分光光度計預熱30min以上，調節波長至603nm，蒸餾水調零。
2．操作表：（1mL玻璃比色皿中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 100 | - | - |
標準品 | - | 100 | - |
提取液 | - | - | 100 |
顯色液 | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻，常溫靜置1min，于603nm處測定各管吸光值，分別記為A測定、A標準和A空白，計算ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標準=A標準-A空白。空白管和標準管只需測1-2次。 注意：靜置時間長短會影響檢測結果，建議直接在1mL玻璃比色皿中直接反應1min，測定吸光值。 | |||
三、白蛋白含量計算
1. 按樣本蛋白濃度計算
白蛋白含量（mg/mg prot）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷（V樣×Cpr）=2.5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr
2. 按樣本質量計算
白蛋白含量（mg/g 質量）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷（W×V樣÷V樣總）=2.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W
3. 按細菌/細胞數量計算
白蛋白含量（mg/106 cell）=ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷（V樣×N÷V樣總）=2.5×ΔA測定÷ΔA標準÷N
4. 按液體體積計算
白蛋白含量（mg/mL）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷V樣= 2.5×ΔA測定÷ΔA標準
C標：標準管濃度，2.5mg/mL；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；N：細菌/細胞總數，以106計。
注意事項：
1、 如果?A測定小于0.005或測定管吸光值接近空白管，可以增加樣本量后再進行測定；如果?A測定大于0.5，建議將樣本上清用提取液適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。
2、 如果樣本加入顯色劑后出現渾濁，建議將樣本上清用提取液適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。
實驗實例：
1. 取100μL人血清樣本，用提取液稀釋10倍，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA測定=A測定-A空白=0.524-0.121= 0.403，ΔA標準=A標準-A空白=0.387-0.121=0.266，按液體體積計算得：
白蛋白含量（mg/mL）=2.5×ΔA測定÷ΔA標準×10 =37.876 mg/mL。
參考文獻：
[1] Tada S, Yasukawa K, Yatomi Y, et al. A simple colorimetric assay to determine the concentration and proportion of human mercaptalbumin[J]. Practical Laboratory Medicine, 2022, 31: e00281.
[2] Muramoto Y , Matsushita M , Irino T .Reduction of reaction differences between human mercaptalbumin and human nonmercaptalbumin measured by the bromcresol purple method[J].Clinica Chimica Acta, 1999, 289(1-2):69-78.
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